多色免疫荧光

【多色免疫荧光】

【媛禧生物：多重荧光免疫组化染色​ step-by-step ​， FFPE 样本】

注意：本实验操作大约需耗时5h，如需中途停止可选择以下步骤：

抗原修复处理后，在修复液中室温冷却

4℃封闭

4℃ 一抗孵育

1. 样品脱蜡准备：

a) 温箱设置到60℃，烤片0.5h以上。

b) 新鲜二甲苯浸片10min，重复2次。

c) 梯度乙醇浸片：100% 3min；100% 3min ；95% 3min；70% 3min。

d) 灭菌水洗片1min，重复3次。

2. 多重荧光免疫组化染色步骤：

第一轮C1：

C1.1抗原修复：把1×抗原修复液倒入修复杯中，微波炉高火加热3min。将脱蜡后的玻片至于修复杯中，低火继续加热15min后冷却至室温。

C1.2 灭活：去除玻片上残存洗液，用免疫组化笔圈出玻片上的样本区域，1× TBST浸洗玻片，滴加3%双氧水浸没样本区域，灭活10min。

C1.3 封闭：用1× TBST浸洗玻片3次，每次2min，滴加封闭液，覆盖样本区域，室温孵育10min。

C1.4 一抗孵育：用抗体稀释液按照说明书浓度稀释一抗，去除玻片上的封闭液，加一抗工作液，使其完全覆盖样本。室温孵育30min 或更长时间（需针对不同抗体做优化调整）。用1× TBST浸洗玻片3次，每次2min。

C1.5 二抗孵育：去除玻片上残存的洗液，滴加HRP二抗工作液，浸没样本区域。室温孵育10min，用1× TBST浸洗玻片3次，每次2min。

C1.6荧光染色放大信号：去除玻片上残存的洗液，滴加1× NEON TSA荧光染料染色工作液，浸没样本区域。室温孵育5min，用1× TBST浸洗玻片3次，每次2min。

重复C1.1—C1.6的操作，进行后续多轮染色。

每轮染色结束后可用荧光显微镜确认染色情况，注意用TBST覆盖样品，防止干片。

3. 复染及封片：

媛禧抗荧光淬灭封片剂含​ DAPI ​，无需另外染核，直接滴加到样品上，然后用盖玻片封片，避免气泡，长期保存请用透明指甲油对盖玻片边缘进行密封。

4. 成像

关于多色荧光

问题：

糖脂代谢与免疫微环境

免疫细胞靶标 糖脂代谢水平的靶标

有没有人之前做过糖脂代谢指标的？

还要配合什么实验？

流式细胞术？

HALO软件可以做什么？

现在运用的多吗？

分析普通的染色？价格是多少？

验证？一般选用多少例？

价格

前期芯片已经做了，保存有什么特殊要求吗？

可不可以芯片上只分析一部分点？

如果不是芯片，白片染色+分析的价格是多少？

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​

​​

​![]()​